ⅠNàcid ucleiciintroducció
L'àcid nucleic es divideix en àcid desoxiribonucleic (ADN) i àcid ribonucleic (ARN), entre els quals l'ARN es divideix en ARN ribosòmic (ARNr), ARN missatger (ARNm) i ARN de transferència (ARNt) segons les seves diferents funcions.L'ADN es concentra principalment al nucli, els mitocondris i el cloroform, mentre que l'ARN es distribueix principalment al citoplasma.Com a base material de l'expressió gènica, l'extracció d'àcids nucleics té un paper extremadament important en la investigació en biologia molecular i el diagnòstic molecular clínic.La concentració i la puresa de l'extracció d'àcids nucleics afectaran directament la posterior PCR, seqüenciació, construcció de vectors, digestió enzimàtica i altres experiments.
Ⅱ Mètode d'extracció i purificació d'àcids nucleics
① Mètode d'extracció de fenol/cloroform
L'extracció de fenol/cloroform és un mètode clàssic per a l'extracció d'ADN, que utilitza principalment dos dissolvents orgànics diferents per tractar les mostres, dissolent l'àcid nucleic basat en l'ADN en la fase aquosa, els lípids en la fase orgànica i les proteïnes entre les dues fases.Aquest mètode té els avantatges de baix cost, alta puresa i bon efecte.Els desavantatges són el funcionament complicat i el temps llarg.
② Mètode Trizol
El mètode Trizol és un mètode clàssic d'extracció d'ARN.El mètode Trizol es divideix en fase aquosa i fase orgànica després de la centrifugació amb cloroform, en què l'ARN es dissol a la fase aquosa, la fase aquosa es transfereix a un nou tub EP, s'obté la precipitació després d'afegir isopropanol i després purificació d'etanol.Aquest mètode és adequat per a l'extracció d'ARN de teixits animals, cèl·lules i bacteris.
③ Mètode de purificació de columna centrífuga
El mètode de purificació de la columna de centrífuga pot adsorbir l'ADN específicament a través de materials especials d'adsorció de matriu de silici, mentre que l'ARN i la proteïna poden passar sense problemes, i després utilitzar un PH alt, baix per combinar l'àcid nucleic, l'elució amb un valor PH baix en sal per separar i purificar l'àcid nucleic.Els avantatges són una alta concentració de purificació, una alta estabilitat, sense necessitat de dissolvent orgànic i un baix cost.El desavantatge és que s'ha de centrifugar pas a pas, més passos d'operació.
④ Mètode de comptes magnètics
El mètode de les perles magnètiques consisteix a dividir la mostra de teixit cel·lular a través del lisat, alliberar l'àcid nucleic de la mostra i, a continuació, les molècules d'àcid nucleic s'adsorbeixen específicament a la superfície de la perla magnètica, mentre que les impureses com les proteïnes i els sucres queden a l'interior. el líquid.A través dels passos de la divisió del teixit cel·lular, la unió de les perles magnètiques amb l'àcid nucleic, el rentat d'àcid nucleic, l'elució d'àcid nucleic, etc., finalment s'obté l'àcid nucleic pur.Els avantatges són el funcionament senzill i el temps d'ús curt, sense necessitat de centrifugació pas a pas.Té requisits tècnics baixos i pot realitzar un funcionament automàtic i massiu.La combinació específica de perles magnètiques i àcid nucleic fa que l'àcid nucleic extret sigui amb alta concentració i puresa.El desavantatge és que el preu de mercat actual és relativament car.
⑤ Altres mètodes
A més dels quatre mètodes anteriors, hi ha cracking bullint, mètode de sal concentrada, mètode de detergent aniònic, mètode ultrasònic i mètode enzimàtic, etc.
Ⅲ Tipus d'extracció d'àcids nucleics
Foregene té la plataforma de PCR directa líder del món, una plataforma d'aïllament d'ARN de doble columna (només ADN + només ARN).Els productes principals inclouen kits d'aïllament d'ADN/ARN, sèries de reactius de laboratori molecular de reactius de PCR i PCR directa.
① Extracció total d'ARN
Les mostres d'extracció d'ARN total inclouen sang, cèl·lules, teixits animals, plantes, virus, etc. Es pot obtenir una gran puresa i una alta concentració d'ARN total mitjançant l'extracció d'ARN total, que es pot utilitzar en RT-PCR, anàlisi de xips, traducció in vitro, etc. clonació molecular, Dot Blot i altres experiments.
Relacionat amb el gen anteriorKits d'aïllament d'ARN
Kit d'aïllament d'ARN total animal--Extraieu de manera ràpida i eficient ARN total d'alta puresa i alta qualitat de diversos teixits animals.
Kit d'aïllament d'ARN total de cèl·lules--Es pot obtenir ARN total altament purificat i d'alta qualitat a partir de diverses cèl·lules cultivades en 11 minuts.
Kit d'aïllament d'ARN total de plantes--Extraieu ràpidament ARN total d'alta qualitat de mostres de plantes amb baix contingut de polisacàrids i polifenols.
Kit d'aïllament d'ARN viral--Aïllar i purificar ràpidament l'ARN viral de mostres com ara plasma, sèrum, fluids corporals lliures de cèl·lules i sobrenedants de cultiu cel·lular.
② Extracció d'ADN genòmic
Les mostres d'extracció d'ADN genòmic inclouen sòl, femta, sang, cèl·lules, teixits animals, plantes, virus, etc. L'extracció d'ADN genòmic es pot utilitzar en la digestió d'enzims, construcció de biblioteques d'ADN, PCR, preparació d'anticossos, anàlisi d'hibridació Western blot, xip de gens, alta -Seqüenciació de rendiment i altres experiments.
Relacionat amb el gen anteriorKits d'aïllament d'ADN
Kit d'aïllament d'ADN de teixit animal--Extracció i purificació ràpides d'ADN genòmic de múltiples fonts, com ara teixits animals, cèl·lules, etc.
Kit Blood DNA Midi (1-5 ml)- Purifiqueu ràpidament l'ADN genòmic d'alta qualitat de la sang anticoagulada (1-5 ml).
Kit d'aïllament d'ADN d'hisop bucal/targeta FTA- Purifiqueu ràpidament l'ADN genòmic d'alta qualitat a partir de mostres de tampons bucals/targeta FTA.
Kit d'aïllament d'ADN vegetal-- Purifiqueu i obteniu ràpidament ADN genòmic d'alta qualitat a partir de mostres de plantes (inclosos mostres de polisacàrids i polifenols)
③ Extracció de plasmidis
El plasmidi és una mena d'ADN de molècules petites circulars a les cèl·lules, que és un portador comú per a la recombinació d'ADN.El mètode d'extracció de plasmidis és eliminar l'ARN, separar el plasmidi de l'ADN genòmic bacterià i eliminar proteïnes i altres impureses per obtenir un plasmidi relativament pur.
Mini kit de plasmidi general- Purifiqueu ràpidament l'ADN plasmídic d'alta qualitat dels bacteris transformats per a experiments de biologia molecular de rutina, com ara la transformació i la digestió enzimàtica
④ Altres tipus d'extracció, extracció de miRNA, etc.
Kit d'aïllament de miRNA animal--Extreu de forma ràpida i eficaç petits fragments d'ARN de 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA de diversos teixits i cèl·lules animals
Ⅳ Requisits per a l'extracció i purificació d'àcids nucleics resultats
① Per garantir la integritat de l'estructura primària de l'àcid nucleic.
② Redueix la interferència de proteïnes, sucres, lípids i altres macromolècules
③ No hi hauria d'haver dissolvent orgànic ni alta concentració d'ions metàl·lics que puguin inhibir l'enzim a les mostres d'àcid nucleic.
④ La contaminació per ARN i altres àcids nucleics s'ha d'eliminar en extreure l'ADN, i viceversa.
Hora de publicació: 24-nov-2022
